|
|
| Клиническая лабораторная диагностика |
 |
ИММУНОБИОСЕНСОРНЫЙ МЕТОД ЭКСПРЕСС-ДИАГНОСТИКИ МИКОЗОВ
Проблема диагностики грибковых инфекций в последние годы стала
весьма актуальной. Применяемые в настоящее время методы микологичес-
кого исследования длительны и трудоемки, что существенно задерживает
процесс лечения и отражается на его результатах. Особую сложность в кли-
нической практике представляет выявление возбудителя заболевания при
микозах внутренних органов, когда отбор материала для микроскопическо-
го и культурального исследования сильно затруднен или невозможен. По-
этому может представлять интерес разработка методов диагностики, осно-
ванных на выявлении грибковых антигенов в сыворотке крови человека.
В настоящей работе представлены некоторые результаты использования
амперометрических иммуноферментных сенсоров для определения антиге-
нов условно-патогенных грибов Candida albicans (CA) и Trichophyton rubrum
(TR) в сыворотках крови от больных с различными формами микотичес-
ких поражений.
Разработанные амперометрические ИФС для определения антигенов СА
и TR состоят из специфической мембраны (биочувствительной части) и
детектирующего элемента (трансдьюсера). Трансдьюсером ИФС служит ста-
ционарный ртутно-пленочный электрод с серебряной подложкой. В каче-
стве биочувствительной части использовали нитроцеллюлозную мембрану
с совместно иммобилизованными с помощью глутарового альдегида фер-
ментом — холинэстеразой и соответствующими антителами к Аг СА или
TR. Измерение концентрации антигенов, в отличие от других иммунофер-
ментных методов, происходит напрямую, без участия промежуточных звень-
ев — детекция осуществляется по величине тока, улавливаемого электро-
дом-трансдьюсером. Данная особенность обусловливает высокую чувстви-
тельность и экспрессивность метода. Наилучшие результаты достигаются
при использовании специфических Ат в разведении 1:20, что соответствует
0. 31 и 0. 07 мг/мл для Ат к СА и TR соответственно. Время определения не
превышает 15-20 минут. Высокая селективность метода была показана в
модельных опытах с антигенами других видов рода Candida.
Иммуноферментный сенсор для определения Аг СА использовали для
уточнения диагнозов в нескольких группах больных, в том числе с микозами
кожи (28 человек) и висцеральными микозами (14 человек). Кроме того,
была обследована группа больных с атопическими дерматитами (10 чело-
век) в отсутствие проявлений грибковой инфекции.
Анализ полученных данных позволяет сделать вывод о хорошей корре-
ляции результатов микологических исследований и определения Аг СА в
сыворотке крови. При этом использование ИФС позволяет проводить коли-
чественное выявление Аг СА, полностью совпадающее с данными анамне-
за и результатами микологического исследования. Выявляемые при этом
концентрации антигенов на уровне 10
-4
-10
-5
мг/мл соответствуют тяжелым
формам грибковой инфекции, а на уровне 10
-6
и 10
-9
мг/мл — средней и
легкой степени соответственно.
Успешное проведение курса антимикотической терапии приводит к
снижению концентрации антигенов СА в сыворотке крови в 100-1000 раз.
При этом степень уменьшения их концентраций прямо коррелирует с кли-
нической эффективностью лечения, что подтверждается и результатами
микологического исследования.
Аналогичные результаты были получены и для микозов кожи, обуслов-
ленных дерматомицетом Trichophyton rubrum.
Вышеописанный метод использовался также в изучении двух клиничес-
ких случаев комбинированных дерматозов, при которых было выявлено со-
вместное присутствие СА и TR. В исследованном случае микоза стоп кон-
центрация Аг СА составляла (5,8+0,9)х10
-6
мг/мл, а Аг TR — (7,8+0,4)х10
-11
мг/мл. При дерматите волосистой части головы концентрации Аг СА и TR
составляла (5,0+0,4)х10
-7
и (4,5+0,8)х10
-10
мг/мл соответственно. Получен-
ные данные о сравнительной интенсивности развития инфекции СА и TR
в обоих случаях подтверждены результатами микологических исследований.
Перекрестных реакций между антигенами СА и TR при амперометричес-
ком тестировании не отмечено. Таким образом, разработанный нами метод
представляется перспективным и для дифференциальной диагностики ком-
бинированных грибковых инфекций
|
|
|
| Просмотров: 1294
|
|
|