ИДЕНТИФИКАЦИЯ МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ГРИБОВ В ЧИСТЫХ КУЛЬТУРАХ И КЛИНИЧЕСКИХ ПРОБАХ ПО ЖИРНЫМ КИСЛОТАМ И СТЕРИНАМ МЕТОДОМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Исследованы химические компоненты клеток некоторых клинически
значимых микроскопических грибов с целью их идентификации как в чис-
той культуре так и в клиническом материале пациентов с разной патологи-
ей без предварительного выделения чистых культур. При сопоставлении
профилей клеточных жирных кислот грибов разных таксонов были выявле-
ны существенные различия в их химическом составе и показана его инфор-
мативность и специфичность на уровне рода. Для дрожжеподобных грибов
Candida albicans маркерами являются гептадеценовая и лигноцериновая
кислоты, для рода Mucor — ейкозановая кислота, для актиномицетов —
разветвленные изо-гексадекановая (Streptomyces, Nocardiopsis), 10-метил-гекса-
декановая (Rhodococcus) кислоты и туберкулостеариновая — для Nocardia.
Специфичность идентификации грибов повышена введением в анализ но-
вых соединений, таких как оксикислоты, спирты и стерины. Длинноцепо-
чечные 2-оксикислоты С24 -С26, не характерные для других микроорганиз-
мов, были обнаружены у представителей родов Mucor, Aspergillus, Candida,
Malassezia. У большинства исследованных штаммов обнаружены разнооб-
разные стерины: эргостерол, ситостерол, брасикастерол, эргостатриен, лано-
стадиенол, и другие вместе с их предшественником — скваленом. Использо-
вание указанных выше веществ в качестве маркеров позволило отследить
присутствие соответствующих микроскопических грибов и аэробных акти-
номицетов в клинических объектах: коже, биоптатах кишечника, фекалиях,
крови, мокроте, моче, ликворе, вагинальном содержимом, эякуляте, ликворе,
раневом отделяемом. Исследовано микробное сообщество очага поражения
кожи больных с атопическим дерматитом, псориазом, угревой болезнью и
алопецией. ГХ-МС анализ методом прямого сканирования и масс-фрагментографии показал наличие в основном грибковых компонентов по сравне-
нию с бактериальными. Обнаружены маркеры C. albicans, Aspergillus,
Propionibacterium, Malassezia и других грибов, бактерий родов Clostridium,
Peptostreptococcus, Propionibacterium, Klebsiella, Flavobacterium, Bacteroides а так-
же стафилококков и микобактерий. Анализ кожного сала — себума — пока-
зал наличие оксикислот С24-С26 и стеринов как у здоровых людей, так и у
больных алопецией и акне. Из биоптатов тонкого кишечника людей с син-
дромом раздраженного кишечника (СРК) выделены в чистой культуре дрож-
жеподобные грибы Candida, микроскопические грибы Penicillum freg, аэроб-
ные актиномицеты Nocardiopsis dassonviley. Показано, что при СРК, наряду с
изменением бактериальной составляющей микробиоты происходит суше-
ственное увеличение численности грибов кандида и уменьшается концен-
трация нокардий, родококков и актиномадура. При антибиотико-ассоции-
рованной диаррее (ААД) и алопеции в тонком кишечнике, а при простати-
те в эякуляте увеличивается содержание микроскопических грибов, проду-
цирующих ситостерол и кампестерол (нитчатые грибы с дрожжевым запа-
хом, выделены в чистой культуре). Из аэробных актиномицетов в 100% слу-
чаев ААД по маркерам отмечено превышение численности псевдонокар-
дий. Подавляющее большинство недиагностируемых форм инфекционного
простатита связано с увеличением на порядок и более концентрации 10-
метил-гексадекановой (10Ме16) кислоты — маркера Rhodococcus equi. При
атопическом дерматите, напротив, численность родококков по данным кон-
троля концентрации 10Ме16 в крови уменьшается при увеличении содер-
жания маркеров других аэробных актиномицетов: нокардий, стрептомице-
тов, а также микроскопических грибов, продуцирующих кампестерол. При-
веденные примеры показывают новые возможности детектирования и мо-
ниторинга клинически значимых микроскопических грибов и аэробных
актиномицетов при заболеваниях инфекционной этиологии и дисбактери-
озах слизистых оболочек кишечника и других органов. Тому способствует
экспрессность метода ГХ-МС микробных молекулярных маркеров, универ-
сальность, селективность и высокая чувствительность в детектировании и
количественном определении возбудителей различной природы: бактерий,
вирусов, грибов и актиномицетов.
|
|
|
| Просмотров: 1493
|
|
