ИЗМЕНЕНИЕ ОБЪЁМА ЭРИТРОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА, ОБУСЛОВЛЕННОЕ АКТИВАЦИЕЙ КАЛЬЦИЙ - ЗАВИСИМЫХ КАЛИЕВЫХ КАНАЛОВ
Варьирование осмолярности среды инкубации эритроцитов человека
сопровождается изменением калиевой проницаемости мембраны этих клеток,
индуцированной кальциевым ионофором А23187 или редокс-агентами
(искусственная электронно-донорная система аскорбат-феназинметосульфат)
[2]. Величина Са2+-активируемой калиевой проницаемости мембраны
эритроцитов зависит от состояния белков мембранного каркаса, в
частности, спектрина [2,3].
Целью работы явилось изучение изменений объема эритроцитов в условиях
варьирования осмолярности среды инкубации клеток при активации
Са2+-активируемых калиевых каналов (К+(Са2+)-каналов).
В работе использовалась кровь практически здоровых доноров. Получение
суспензии эритроцитов проводили традиционным способом [3]. Изменение
объема клеток оценивали спектрофотометрически по величине оптической
плотности (длина волны 800 нм). Снижение осмолярности среды инкубации
до 220 мосм осуществлялось за счет уменьшения концентрации NaCl,
повышение осмолярности до 420 и 520 мосм достигалось добавлением
соответствующих концентраций сахарозы к изоосмотическому раствору (320
мосм). Инкубация клеток в гипоосмотической среде приводила к набуханию
эритроцитов, что находило отражение в снижении оптической плотности
суспензии, так как снижалось ее светорассеяние. Повышение осмолярности
среды сопровождалось сжатием эритроцитов, о чём свидетельствовало
уменьшение измеряемого показателя из-за увеличения светорассеяния [4].
Стимуляция К+(Са2+)-проницаемости мембраны эритроцитов путем добавления
кальциевого ионофора А23187 (0,5 мкМ) или редокс-агентов (искусственная
электронно-донорная система аскорбат-феназинметосульфат) [1,2,3]
сопровождалась уменьшением объема клеток, что подтверждалось снижением
оптической плотности суспензии. Причиной сжатия клеток может быть выход
воды из эритроцитов вслед за ионами калия. Добавление к суспензии
эритроцитов 3 мкМ клотримазола (блокатора К+(Са2+)-каналов) подавляло
А23187- индуцированное снижение объема клеток, что указывает на участие
К+(Са2+)-каналов в изменении объема эритроцитов.
Для выяснения роли спектрина в регуляции К+(Са2+)-каналов проводили
необратимую тепловую денатурацию белка путем инкубации клеток при 50ºС
в течение 10 мин. Как в изоосмотических, так и в гипо- и
гиперосмотических условиях изменение объёма клеток, подвергнутых
тепловой обработке, при добавлении Са 2+- ионофора было более выражено
по сравнению с интактными клетками. Это может свидетельствовать об
участии спектрина в процессах стабилизации объема эритроцитов.
Список литературы:
1. Гюльханданян, А.В. Са2+- зависимый выход К+ из эритроцитов,
индуцированный окислительными процессами / А.В. Гюльханданян, Г.М.
Геокчакян // Биофизика. – 1991. – Т. 36, № 1. – C. 169 – 171.
2. Изучение объем-зависимой регуляции Са2+-активируемых калиевых
каналов эритроцитов в норме и у больных сахарным диабетом 2 типа в
сочетании с артериальной гипертензией / С.В. Кремено, И.В. Петрова,
А.В. Ситожевский и др. // Бюлл. эксперим. биологии и медицины.- 2004.-
Т. 137, № 1.- С. 31-34.
3. Орлов, С.Н. Са2+-активируемые калиевые каналы эритроцитов,
исследованные методом регистрации Са2+-индуцированных изменений
мембранного потенциала / С.Н. Орлов, И.В. Петрова, Н.И. Покудин и др.
// Биол. мембраны. – 1992. – Т. 9, № 9. – С. 885 903.
4. Орлов, С.Н. О механизме регуляции транспорта ионов через
плазматическую мембрану при изменении объёма клетки. / С.Н. Орлов, Н.И.
Покудин, Г.Г. Ряжский и др. // Биологические мембраны.- 1988.- Т.5, №
9.- С. 1031-1041.
|
|
|
| Просмотров: 1739
|
|
